Barwienie przetrwalników.

KaMiLciA :)

moze komus sie przyda. material potrzebny na wejsciowke na nastepne (trzecie) cwiczenie.

BARWIENIE PRZETRWALNIKÓW

 METODA DORNERA
1. Do zawiesiny bakteryjnej w małej próbce dodajemy taką samą objętość stężonej fuksyny karbolowej.
2. Wstawiamy do łaźni wodnej i gotujemy 20 min.
3. Po tym czasie probówkę wyjmujemy, wstrząsamy i za pomocą ezy nanosimy 1-3 krople mieszaniny na szkiełko podstawowe.
4. Do tego dodajemy 1-3krople nigrozyny, rozprowadzamy na powierzchni szkiełka, suszymy w temp.pokojowej, oglądamy pod immersją.

WYNIKI:
- przetrwalniki – czerwone
- komórki – bezbarwne
- tło – czarne

 METODA SHAEFFERA – FULTONA
1. wykonać zawiesinę drobnoustrojów na szkiełku.
2. Utrwalić w płomieniu palnika.
3. Nanieść na szkiełko zieleń malachitową lub brylantową; podgrzewać nad parą przez 5min.
4. Spłukać dokładnie wodą.
5. Nanieść fuksynę zasadową na ok.30seq.
6. Spłukać wodą.
7. Oglądać pod immersją.

WYNIKI:
- przetrwalniki – zielone
- komórki wegetatywne – czerwone

 METODA GRAMA
1. Przygotowanie szkiełek:
a) mycie
b) odtłuszczanie (opalanie nad płomieniem palnika)
2. Nakładanie materiału
a) wykonanie ezą zawiesiny na szkiełku podstawowym w kropli soli fizjologicznej
b) wysuszenie preparatu w temp.pokojowej
c) utrwalenie preparatu nad płomieniem palnika
3. Barwienie
a) Fiolet krystaliczny 2minuty, spłukać wodą
b) Płyn Jugola 1minuta, spłukać wodą
c) Alkohol 20seq, spłukać wodą
d) Fuksyna 15 seq, spłukać wodą
4. Osuszyć preparat bibułką i oglądać pod immersją.

WYNIKI:
- Gram (+) – niebieski
- Gram (-) – czerwony

 METODA ZIEHL – NEELSENA
1. Na utrwalony rozmaz bakterii na odtłuszczonym szkiełku podstawowym nanosimy barwnik podstawowy (stężona fuksyna) na 15min. W trakcie barwienia podgrzewamy preparat palnikiem (do tzw. „trzech par”).
2. Zlewamy barwnik i spłukujemy wodą destylowaną.
3. Odbarwiamy preparat w 3%roztworze HCl w etanolu (alkohol kwaśny).
4. Spłukujemy wodą destylowaną.
5. Nanosimy barwnik kontrastowy, np. błękit metylenowy na 10min.
6. Spłukujemy wodą destylowaną.
7. Suszymy preparat na pasku bibuły i przeprowadzamy obserwacje w mikroskopie świetlnym z zastosowaniem immersji.

WYNIK:
- bakterie kwasooporne – czerwony (pochodzący z fuksyny; nie odbarwiają się one w alkoholu kwaśnym)
- bakterie niekwasooporne – niebieski (od błękitu metylenowego; odbarwiają się w alkoholu kwaśnym – fuksyna zostaje „wypłukana”)

 METODA MANEVALA ( barwienie pozytywno-negatywne w celu uwidocznienia otoczek bakteryjnych)
1. Przygotowanie szkiełek podstawnych (umyć, osuszyć, odtłuścić, ostudzić)
2. Nanieść kroplę (oczko ezy) czerwieni KONGO na szkiełko podstawowe.
3. Zrobić zawiesinę z hodowli bakteryjnych w kropli czerwieni KONGO i równomiernie rozprowadzić na powierzchni szkiełka.
4. Pozostawić preparat do wyschnięcia. Nie utrwalać nad płomieniem palnika.
5. Następnie nakropić na szkiełko odczynnik Manevala na 1min
6. Zlać odczynnik.
7. Preparat pozostawić na samoistnego wyschnięcia. Oglądać pod immersją.

WYNIK:
- komórki – czerwone
- tło – niebieskie
- otoczki – bezbarwne

 BARWIENIE PROSTE BŁĘKITEM METYLENOWYM (barwienie pozytywne)
1. Bakterie nanieść na szkiełko podstawowe.
2. Po wyschnięciu, preparat utrwalić poprzez przeciągnięcie szkiełka nad płomieniem palnika 3 razy. NIE TRZYMAĆ SZKIEŁKA W PŁOMIENIU.
3. Nanieść roztwór błękitu metylenowego i pozostawić na 5 minut.
4. Delikatnie spłukać wodą, pozostawić do wyschnięcia (można osuszyć bibułą).
5. Oglądać pod immersją.
 BARWIENIE PROSTE NIGROZYNĄ (barwienie negatywne)
1. Wykonać ezą zawiesinę w kropli soli fizjologicznej na szkiełku podstawowym.
2. Do kropli zawiesiny dodać kroplę barwnika – nigrozyny (tusz chiński).
3. Dokladnie rozprowadzić na powierzchni szkiełka.
4. Pozostawić preparat do wyschnięcia (w temp.pokojowej).
5. Oglądać pod immersją.

 METODA NEISSERA
Barwnik Neissera I: błękit metylenowy 0,1g
Alkohol etylowy - 0,2ml
Woda destylowana – 100ml

Barwnik Neissera II: fiolet krystaliczny – 1g
Alkohol etylowy – 10ml
Woda destylowana – 300ml

Roztwór chryzoidyny: chryzoidyna – 1g
Woda destylowana (wrząca) – 300ml
(przesączyć przez sączek bibułowy)

1. Wykonać zawiesinę drobnoustrojów na szkiełku.
2. Utrwalic w płomieniu palnika.
3. Zmieszać barwnik Neissera I i II w stosunku 2:1
4. Barwienie:
 barwienie Neissera I +II = 10min
 spłukać wodą
 chryzoidyna – 10 seq
 bez spłukiwania wodą wysuszyć preparat w bibule.
5. Oglądać pod immersją.

WYNIK:
- ziarna wolutyny – ciemnogranatowe
- komórka – żółto-brązowa

OGLĄDANIE PREPARATÓW POD IMMERSJĄ
1. Ustawić preparat na stoliku mikroskopu.
2. Nałożyć na preparat kroplę olejku immersyjnego.
3. Ustawić na rewolwerze 100x „I”
4. Makrośrubą (ostrożnie pod kontrolą wzroku) opuścić obiektyw do powierzchni preparatu (do zanurzenia w olejku immersyjnym).
5. Patrząc w okular wolno podnosić obiektyw do góry aż do uzyskania obrazu.
6. Ostrość obrazu regulować mikrośrubą.
7. Po obejrzeniu preparatu wyjąć szkiełko oraz wytrzeć z olejku stolik i obiektyw.

KaMiLciA :)

prosciej byloby wstawic zdjecia, tak jak to robi wiekszosc z was Razz

ale:
1.nie zglebilam jeszcze tajnikow wiedzy dotyczacej umieszczania zdjec tam,gdzie wiekszosc z was je umieszcza Wink

2. ta forma jest latwiejsza do drukowania (jakby ktos mial ochote cos takiego zrobic) Smile

wojtek

np tak?

[link widoczny dla zalogowanych][link widoczny dla zalogowanych]

[link widoczny dla zalogowanych][link widoczny dla zalogowanych]

[link widoczny dla zalogowanych][link widoczny dla zalogowanych]

[link widoczny dla zalogowanych][link widoczny dla zalogowanych]

[link widoczny dla zalogowanych][link widoczny dla zalogowanych]

KaMiLciA :)

ooo wlasnie Smile

nie chwal sie, ze umiesz Razz

ja tez sie naucze! Razz

Marta

to jest potrzebne na trzecie cwiczenie? a nie bylo tego na cw drugim?

KaMiLciA :)

ale u nas babka powiedziala, ze bedzie przynajmniej jedno pytanie z barwienia na wejsciowce.

Magda La...

u nas tak samo mówiła Smile

Marta

aa to nie wiedziałam, dzięki za informacje:))

Marta

Kochani, a powiedzcie mi jeszcze czego trzeba się nauczyć na 3 ćwiczenie. Rozpiska rozpiską, a ja i tak nie wiem. Może mówili Wam coś asystenci?

Magda La...

barwienia i budowa kom bakteryjnej ciagle, tyle tylko, ze mamy sie skupic na elementach dodtakowych np przetrwalniki otoczka rzeski fimbrie itp